检测蛋白质用什么作用?

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目前检测蛋白最常用的方法有三种,分别是免疫化学法、酶联免疫分析法和质谱分析法 1. 免疫化学法(immunochemistry)是利用抗原-抗体特异性反应的原理来检测目标蛋白的方法。该方法可以检测到样品中含量极微量的蛋白质,在生化与分子生物学研究中应用广泛。根据抗体来源的不同,可以将免疫化学方法分为以下几种: (1) 放射免疫分析(radioimmune analysis,RIA): 是将含放射性的标记抗体与未标记的抗体结合,通过分离含有荧光标记抗体的复合物或细胞,从而得到待测蛋白的量。由于放射性同位素具有致癌性且无法消除,因此该方法目前已较少使用;

(2) 酶免疫分析(enzyme immune analysis,EIA): 是在免疫化学的基础上引入了 enzyme linked immunosorbent assay, ELISA。该方法先利用酶标记抗体识别抗原,再通过底物的颜色变化来定量测定蛋白的含量。因操作方便,灵敏度较高且能进行批量分析,已成为目前应用最为广泛的检测蛋白方法之一;

(3) 免疫组化(immunohistochemistry,IHC): 是基于抗原抗体的特异性反应而应用于组织学样本中的蛋白质检测。与 ELISA类似,也是先用酶标记抗体,再利用底物显色。但因免疫组化需要专门的仪器设备,且对操作人员要求高,所以一般用于实验室研究,不能进行批量分析。除了以上三种,还有蛋白芯片和全息激光扫描技术等,这些技术的检测原理与ELISA大致相同,多应用于药物筛选和代谢组学的研究。

2. 酶联免疫分析法(Enzyme-Linked Immunosor bent Assay ,ELISA) 是指利用酶标记抗体识别抗原,并通过测定其浓度来判断待检物质的存在与否及其含量多少的一种分析方法。以酶标记抗体作为敏感的标志物,与抗原或抗体发生特异性反应时,会释放出一定量有颜色的物质,可以通过测定颜色改变程度进而计算出待检物质的含量。该方法是目前应用最广的检测蛋白手段,具备操作简便快速、灵敏度高、可以批量处理及成本较低的优点。

3. 质谱分析法(mass spectrometry, MS)是通过测量带电粒子的荷质比来确定粒子质量的一种分析技术。它拥有超高灵敏度和精确度,能够检测浓度仅为pg/ml的水平,是目前最先进可靠的蛋白质检测手段。根据离子源的不同,可以分为电磁波光谱法电喷雾电离质谱仪(ESI-MS)和基质辅助激光解析电离质谱仪(MALDI-MS)。其中 ESEM-MS 常用于鉴定蛋白质,MALDI-MS则常用来检测蛋白水平的变化。

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